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本制品冻干微球制品，内含恒温扩增所用的反应缓冲液、Mg²⁺、dNTP、Bst 4.0 DNA/RNA聚合酶等，其不包含任何染料，使用时只需要加入引物、模板即可进行核酸恒温扩增。Bst 4.0 DNA/RNA聚合酶对DNA或RNA样本均可进行恒温扩增，是进行LAMP及RT-LAMP扩增反应的绝佳试剂。

本制品不包含显色染料，用户可选择搭配相关染料或检测手段进行LAMP反应，包括搭配 OTG染料管进行橙绿变色、搭配标记Oligo进行试纸条检测、搭配荧光染料进行荧光检测、搭配Molecular Beacon探针进行荧光检测等方法。然而，本试剂不支持浊度、pH变色、HNB变色反应等检测方法，请勿尝试。

• 尽管我司选取的为高密封性的EP管，但也时有EP管发生液体泄露。在反应管倒置时，可用纸巾包裹EP管，一旦发生泄露，丢弃纸巾，防止台面污染。
  
• 整个操作过程，佩戴手套、口罩等个人防护用品。

• 关于矿物油的使用，在配制完LAMP反应体系后，可加入一滴矿物油覆盖于反应液上部，以减少气溶胶的污染。矿物油并不影响OTG染料的溶解。
  
• 关于OTG橙绿变色管：橙绿变色染料（OTG Dye）以烘干的形式预加在8联管盖上。LAMP反应完毕后，将0.2mL EP管颠倒溶解OTG染料后。LAMP的反应产物将与OTG染料形成绿色肉眼可见变色反应（阳性），而未扩增的EP管为深橙色（阴性）。本试剂管常温长期保存。
  
• 关于LAMP试剂的建议，本制品和OTG橙绿变色管均为室温稳定状态，可长期保存。将扩增引物加入到OTG橙绿变色管底部，于70℃烘干，再加入一粒冻干球即可制备成全体系检测试剂。
  
• 在使用其它荧光染料时，使用浓度可自行优化，通常来讲，参考供应商提供浓度的0.25～0.8×，过高浓度的染料可能导致扩增失败。

• 配制变色LAMP反应体系
  
  • 按下表向OTG染料管（0.2mL EP）中加入各成分：
    

    成分	用量
    LAMP扩增预混液冻干球	1粒
    10×LAMP Primer Mix	2.5μL
    模板DNA/RNA	X μL
    ddH2O	至25μL

    • 10×LAMP Primer Mix浓度：FIP/BIP 16μM each、LoopF/B 4～8μM each、F3/B3 2μM each。
  • 全部试剂加入完毕后，轻弹EP管底部后，再盖上OTG橙绿变色管（盖上管盖后务必不能再剧烈混合与倒置，以防止将管盖上的OTG染料溶解，OTG染料一旦混入反应液中将会终止LAMP反应）。
• 反应体系配好后，置于65℃进行反应15～30min。（扩增良好的引物组合，通常20min即可变色，一般不超过30min）。
  
• 观察结果：反应结束后，从加热装置中将反应管取出，室温2min，使整个反应管冷却下来。再次用力将反应管盖压紧，以防止液体泄露。将反应EP管倒置，并手腕轻甩，反应液浸泡EP管盖上的OTG染料，静置1min（中间可轻弹1～2次，以加速溶解OTG染料）。再将EP反应管正置，并轻甩反应液到EP管底部，此时扩增样品将变为鲜艳肉眼可见绿色，而阴性未发生扩增的管将为深橙色。
  
  • 观察结果时，尽可能不要与配制反应空间共用，以防止污染操作台。